双链特异性直接消化cDNA削减***盒
DsDD cDNA Subtraction Kit Wako双链特异性直接消化cDNA削减***盒
Simple and quick enrichment of specifically expressed genes
TIBCO削减法杂交法是一种利用***特异性显现，鉴定***的有效方法之一。迄今为止有各种各样不同的方法被提出，然而，无论哪种方法的操作都较为烦杂且作业工序多，需要时间和高技术。而且，cDNA Library 不能用于作为启发材料，因而每次都不得不用mRNA准备Tester及Driver cDNA。
DsDD（Duplex-specific Direct Digestion）cDNA Subtraction Kit Wako 是以cDNA library 的调制为基础，运用减去法调制Tester 及Driver cDNA。再利用Tester及cDNA 显现***的非特异性，形成高品质的***同伴。在二条链的特异性DNA核酸酶存在的情况下，利用Duplex-specific nuclease,分解杂化的DNA。之后，利用ExonucleaseⅠ分解除去在Tester cDNA中特异显现的残留Drive cDNA，以实现cDNA***浓缩。
在解析***细胞***特异性机能和性质时，Tester cDNA 由***细胞***调制，Driver cDNA由正常细胞***调制，浓缩来自***的cDNA，可显现***细胞***的特异性。DsDD cDNA Subtraction Kit Wako中的cDNA Library 可用于作为起动材料，此方法的全部工序可在2天完成，是划时代的技术。
【***盒内容】
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● Lambda Exonuclease
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5µl X 1支
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● 10 X Lambda Exonuclease Buffer
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25µl X 1支
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● 4 X Hybridization Buffer
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25µl X 1支
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● Duplex—specific nuclease
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5µl X 1支
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● 2 X Duplex-specific nuclease Buffer
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25µl X 1支
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● ExonucleaseⅠ
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5µl X 1支
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● 10 X Exonuclease I Buffer
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25µl X 1支
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● Ethachinmate
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50µl X 1支
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● Stop Solution
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50µl X 1支
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● 3mol/Sodium Acetate, PH5.2
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200µl X 1支
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● 使用手册
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1本
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【***盒原理】
注意Tester cDNA Library及Driver cDNA Library。
对于cDNA媒介物，Tester使用同一方向插入的cDNA Library。
1. Tester Library（异常）→DNA放大 →由Library 放大的Tester dsDNA.
Driver Library（正常）→DNA放大 →由Library 放大的Diver dsDNA.
2. Tester DNA的调制：
使用仅一侧磷酸化的cDNA程序库，用启发剂进行DNA放大，经Lambda Exonuclease 处理，调制出1条链cDNA。
注1） Tester cDNA放大。
DNA放大时，对附带磷酸的5ˊ末端使用启发剂。
注2） Lambda Exonuclease 处理。
识别2条链DNA的5ˊ磷酸末端，由5ˊ→3ˊ方向分解。如果无法形成高品质的Tester同伴，可适当提高减去法效率。
3. Driver DNA的调制：
使用cDNA程序库进行DNA放大，将multi-Croning两侧的部分部位用限制酶处理。
注3）制限酶处理：
除去两端的接合部分，以防止杂交时的差错及杂化。
4. 杂交：
Tester cDNA和Driver cDNA在68℃情况下反应16--20小时。(混合比为1：200)过量的Driver cDNA与除特异性***以外的Tester cDNA大部分形成dsDNA。
注4）热变性后，Tester ss cDNA 和Driver ds cDNA不进行杂交。
5. DSN处理：
利用DSN作用于2条链的特异性，分解除去杂化形成的2条链cDNA。
注5）进行高特异性反应，其反应温度高于68℃。
6. DNA放大
7. Exonuclease I 处理
利用Exonuclease I 分解除去未形成杂化的残留Driver ss cDNA。使用酶切断特异性1条链DNA。除特异性***以外的一条链状态全部分解。自实验开始起2天内，即可得到***率的Subtracted cDNA。
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产品编号
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品名
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容量
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294-62001
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DsDDcDNA Subtraction kit Wako
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5次用
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伊普瑞斯科技有限公司
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