一氧化氮合成酶(NOS)活性测定***盒说明书
规格：50T
一、原理
O2
NOS
L-Arg 瓜氨酸+NO
NADPH NADP
氧合Hb 高铁Hb
二、***
1.磷酸钾缓冲液 100ml
2.缓冲液A 40ml
2.血红蛋白 20mg
(实验前需将血红蛋白需称15.48mg倒入A液，搅拌溶解，如有杂质进行过滤，一次用不完可放入-20℃保存)
3.B液 40ml
4.C液 40ml
(用前将标有NADPH的小管中固体全部倒入C液瓶中，搅拌溶解，可分装后－20℃保存)
5.NADPH 11.96mg
三、方法
1. 制备***匀浆： 取******(***需用生理盐水冲洗),加入40mM pH7.2磷酸钾缓冲液10－20%（W/V）,匀浆搅拌,离心10,000转/分20min，取上清液（D液）。
2. 取A液0.8ml，C液0.8ml，D液0.6ml混合振荡，加入B液0.8ml，立即计时，振荡，比色。
3. 比色
1) 用双波长分光光度计：选择401nm和421nm，每隔30秒钟记录吸光值，计录到3min。
2）如***波长分光光度计，可用分光光度计，先用401nm测定一个样品，再用421nm测定另一个样品，计录时间应一致，同样每隔30秒计录吸光值，共计录到3min。
注：A：用的光径为1cm比色杯。 B：对照用40mM pH7.2磷酸钾缓冲液。
四、计算
1. NOS活性单位表示法：每克***每分钟产生一氧化氮量（nmol）,即nmol/min每克***。
2. 计算公式：NOS活性＝[(a-b)-(a’-b’)]×194.3
a:30秒时的401nm处的吸光值 b :30秒时的421nm处的吸光值
a’:90秒时的401nm处的吸光值 b’:90秒时的421nm处的吸光值
注：每分钟吸光值可以任意选择时间间隔，但必须是1分钟。
五、保存
4℃保存，有效期半年。