microRNA和piRNA研究
AGO蛋白家族
AGO蛋白家族是指与以小分子RNA(***all RNA)为介质的遗传***发现控制机构有关的蛋白质群。基于氨基酸序列的相似性，AGO蛋白家族又分为AGO亚族与PIWI亚族，已发现在生殖细胞、***（ES、iPS等）中有表达。
和光纯药公司推出了众多用于对miRNA和mRNA （存在于细胞和***中的RISC的组成成分）进行功能分析的工具，这些工具不仅适用于对miRNA的分析，同时也适用于对靶标mRNA的分析。
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AGO蛋白家族 |
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AGO亚族 |
PIWI亚族 |
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人 |
AGO1, AGO2, AGO3, AGO4 |
PIWIL1 / HIWI, PIWIL2 / HILI, PIWIL3, PIWIL4 / HIWI2 |
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鼠 |
AGO1, AGO2, AGO3, AGO4 |
PIWIL1 / MIWI, PIWIL2 / MILI, PIWIL4 / MIWI2 |
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RNA结合蛋白 |
microRNA、siRNA等 |
piRNA等 |
1. microRNA研究
microRNA（简称miRNA）是一种长约22个nt（核苷酸）的内源性RNA分子，通过与靶标mRNA的互补配对，可***mRNA的裂解和翻译，从而在动植物体内发挥重要的调控作用。据推测，在***和鼠体内存在上千种miRNA，因此对于miRNA的各种研究（例如对功能不明的新型miRNA的鉴定以及对与特定***相关的miRNA功能的说明等）迅速发展成为一大研究领域。近来，***中存在miRNA这一重大事实的发现，开创了利用miRNA作为生物标志物进行包括***症在内的******的***未来。一般认为，microRNA发挥作用的方式如下：先在细胞中经过多个阶段发育成熟，再与蛋白质结合生成蛋白质复合物“RISC”（“RNA诱导沉默复合物”），然后与RISC主要组成部分AGO亚族蛋白结合，***后再与靶标mRNA结合，从而达到降解mRNA链或***翻译的目的。
***中存在4种AGO亚族蛋白（hAgo1～hAgo4），可泛表达***信息，但表达水平因类型而异。在AGO亚族蛋白中，只有AGO2具备对靶标RNA裂解的切割酶活性，因此是一种***具表达水平的蛋白质，可在miRNA合成途径中发挥至关重要的作用。由于RISC能够与AGO蛋白***发生***沉淀，因此可从RISC沉淀物中回收miRNA；而且进一步研究表明，靶标miRNA为共沉淀剂，因此***沉淀成法为研究miRNA功能的基本方法。
鉴于上述情况，和光纯药特别推出了众多对miRNA功能进行分析的工具，其中主要为利用抗AGO***的miRNA研究工具。通过组合使用上述工具，即可实现对miRNA和mRNA（存在于细胞和***中的RISC的组成成分）的综合分析—miRNA分析和靶标mRNA分析。
1）microRNA纯化***盒系列：
一种基于利用AGO蛋白***的***沉淀方法
特性：
1）适用于内源性AGO蛋白的***沉淀法
2）miRNA与AGO蛋白结合的纯化性能高
3）其他RNA（如rRNA（核糖体）和RNA的降解片段）的污染度低
4）适用于microRNA的******以及纯化microRNA成分的微阵列技术（测定***表达谱的方法和技术）
microRNA提取***盒，人/鼠AGO1（10次反应；和光.：291-70201）
microRNA提取***盒，人AGO2（10次反应；和光.：292-66701）
microRNA提取***盒，鼠AGO2（10次反应；和光.：292-67301）
microRNA提取***盒，人AGO3（10次反应；和光.：297-70301）
（2）cDNA编码microRNA***盒的制备
和光纯药microRNA******盒可以用于制备cDNA编码microRNA，只需在microRNA片段制备后的1.5日之内即可完成***过程。该***盒中含有从虾中提取的碱性磷酸酶（SAP），能与其中的耐热性单链DNA连接酶（另售）和原改良接头发生连接反应。与传统方法（利用从***中提取的碱性磷酸酶和T4 RNA连接酶）相比，***效率显著提高。
特点：
1）耐热性连接酶能够实现接头的准确连接，从而提高***效率
2）适用于microRNA***以形成二级结构
3）操作简单，只需在1.5日之内即可生成cDNA编码microRNA
和光microRNA******盒（8次反应；和光.：290-66501）
接头连接***、准确、简捷
耐热性单链DNA连接酶重组体解决方案（200个单位（和光.：298-65103）；500个单位（和光.：292-65101）
和光靶标mRNA******盒（10次反应；和光.：298-68001）
和光纯药生产的靶标mRNA******盒用于借助微量mRNA实现cDNA扩增，尤其是利用AGO IP RNA片段实现microRNA靶标mRNA***。扩增后的cDNA将成为microRNA的靶标mRNA。
特点：
1）方法简易
2）具备实现微量mRNA扩增的性能
3）cDNA扩增方式不依赖于mRNA的长度
4）适用于microRNA靶标mRNA的研究
和光PCR纯化***盒（30次反应（和光.：298-67901）
和光纯药生产的PCR纯化***盒，用于在利用RT-PCR或PCR完成DNA合成后的仅10分钟内去除在各种分子生物学试验反应缓冲液中形成的引物、引物二聚体、dNTP（三磷酸脱氧核苷酸）以及诸如DNA聚合酶、限制性内切酶等多种酶。
THUNDER Taq Gold DNA聚合酶（不含镁离子的缓冲液）
（250个单位；和光.：317-07081）：PCR（聚合酶链式反应）用耐热性DNA聚合酶
建议采用THUNDER Taq Gold DNA聚合酶（不含镁离子的缓冲液）来***非特异性扩增。THUNDER Taq Gold DNA聚合酶用于PCR的热启动，在进入PCR循环前，在95℃的温度下经过10分钟的热处理后被活化。由于利用THUNDER Taq Gold DNA聚合酶（不含镁离子的缓冲液）方式实现扩增后的DNA片段是一种腺***呤的3'末端，因此能够直接插入到T载体中。
（3）***
AGO1***、单******（1F2）
（50μL（和光.：018-22401））〈用于蛋白质印迹法〉
AGO1***、单******（2A7）
（50μL（和光.：015-22411））〈用于***沉淀法〉
抗人AGO2***、单******（4G8）
（50μL（和光.：011-22033）；100μL（和光.：015-22031）
〈用于蛋白质印迹法、***沉淀法以及***细胞化学染色法〉
抗小鼠AGO2***、单******（2D4）
（50μL（和光.：014-22023）；100μL（和光.：018-22021）
〈用于蛋白质印迹法、***沉淀法以及***细胞化学染色法〉
抗人AGO3***、单******（1C12）
（50μL（和光.：018-23241））〈用于***沉淀法〉
2. piRNA研究
PIWIL1***、单******（2C12）
(100 μL （和光.：017-23451））〈用于***沉淀法〉
特点：
1) 可***沉淀内在性PIWIL1蛋白质。（5～10?g浓度为10%的蛋白G微珠）
2) 可***沉淀PIWI1结合piRNA。
3) 可在人、鼠的***和细胞中使用。
使用例：
- 小鼠***中内源性PIWIL1的***沉淀（IP)-1
Lane 1: NEC14 cells, mouse IgG IP分级(1/2 vol.)
Lane 2: NEC14 cells, 2C12 IP分级(1/2 vol.)
Lane 3：小鼠***IgG IP分级(1/2 vol.)
Lane 4：小鼠***, 2C12 IP分级(1/2 vol.)
Cell number: 1 x 107 cells
***（小鼠***）重量25mg
******（蛋白质印迹）
Anti PIWIL1 polyclonal antibody(gifted from Dr. Miyagawa, Osaka Univ.)
This antibody is not ***ailable from Wako.
- 小鼠***中内源性PIWIL1的***沉淀（IP)-2
Lane M：分子量Marker
Lane 1：小鼠IgG IP分级(1/2 vol.)
Lane 2: 2C12 IP分级(1/2 vol.)
***（小鼠***）重量25mg
******（蛋白质印迹）
Anti PIWIL1 polyclonal antibody
(gifted from Dr. Miyagawa, Osaka Univ.)
This antibody is not ***ailable from Wako.
lane M：分子量Marker
Lane 1：小鼠IgG IP RNA 分级(1/2 vol.)
Lane 2: 2C12 IP RNA 分级(1/2 vol.)
***（小鼠***）重量25mg
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