细胞凋亡荧光检测***盒（Apoptosis Fluorometric Assay Kit）

细胞凋亡荧光检测***盒（Apoptosis Fluorometric Assay Kit）

细胞凋亡是细胞的基本特征之一，在机体的胚胎发育、***修复、内环境的稳定等方面都起到十分重要的作用。

Annexin V是一种分子量为35.8KD的Ca2+依赖性磷脂结合蛋白，能与细胞凋亡过程中翻转到膜外的磷脂酰丝氨酸（Phosphatidylserine, PS）高亲和力特异结合。标记荧光物质的Annexin V结合到凋亡细胞后，通过荧光颜色可以区分出凋亡细胞与正常细胞。

Caspase家族在介导细胞凋亡的过程中起着非常重要的作用，其中caspase-3为关键的执行分子，与DNA断裂、染色质凝聚和凋亡小体形成有关。Caspase-3在正常状态下以酶原的形式存在于胞浆中，没有活性；但在细胞发生凋亡阶段，它被***，活化的Caspase-3由两个大亚基和两个小亚基组成，裂解相应的胞浆胞核底物，***终导致细胞凋亡。Caspase-3荧光光度法检测***盒就是根据这一特点，设计出荧光物质偶联的短肽(Ac-DEVD)2-R110，其中DEVD是一个四肽化合物，在共价偶联时，R110不能被激发荧光，在连续两个反应步骤后，短肽被完全水解后释放出R110。水解的***步产生一个单肽中间体Ac-DEVD-R110，此物与吸收和发射波长与R110 (ex\em= 496/520 nm)相似，但是只有R110激发荧光的10％。水解的第二步释放的自由的R110才能被激发发射荧光。根据释放的R110荧光强度的大小，可以测定caspase-3的活性，从而反映Caspase-3被活化的程度。***盒中的Ac-DEVD-CHO, 是caspase-3的***剂，作为整个反应的负调控物。***盒中的 R110 用来做标准曲线，用来定量caspase-3的活力。

CD95/Fas和TNF引发细胞凋亡过程中，一系列caspase级联式地活化，其中caspase-8的活化是其***步反应。快速检测哺乳动物细胞或者***裂解液中caspase-8活性，常用的办法将caspase-8序列特异性的多肽偶联至发色基团(Ac-IETD)2-R110，当该底物被caspase-8剪切后，R110即游离出来。可以测定荧光的发射强度，也可通过***或分光光度计（λ=405nm 或400nm）测定其吸光值，来考察caspase-8的活化程度。***盒中也有Ac-IETD-CHO，R110，Cell lysis buffer，Assay buffer。

货号30008-2***盒内容物：

• 100ml,Cell Lysis Buffer
• 4*1.25ml Assay Buffer
• 500ul 酶底物(Ac-DEVD)2-R110（1mM）
• 20ul 酶***剂Ac-DEVD-CHO（5mM）
• 1ml R110（80uM）

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