兔elisa***盒-默沙克生物科技

包括以下步骤：1)抗原表位的计算机筛选；2)抗原的制备；3)血1清的采集；4)间接ELISA方法的建立；5)间接ELISA方法的敏***和特异性验证；6)***盒的稳定性验证；7)对屠宰场进行临床检测。该方法简单、快速、灵敏度高、特异性强、稳定性合格、重复性好。应用本发明制得的***盒能有效检出感1染猪的戊型肝1炎病毒，适用于大批量发病样本的检测，可用于猪戊肝的快速诊断，并预防、控制猪戊肝1病毒的流行和阻断戊肝1病毒由猪向人传播。

（2）流水冲洗式：流水冲洗法初用于小珠载体的洗涤，洗涤液仅为蒸馏水甚至可用自来水。洗涤时附接一特殊装置，使小珠在流水冲击下不断地滚动淋洗，持续冲洗2min后，吸干液体，再用蒸馏水浸泡2min，吸干即可。浸泡式犹如盆浴，流水冲洗式则好比淋浴，兔elisa***盒，其洗涤效果更为彻底，且也简便、快速。已有实验表明，流水冲洗式同样也适用于微量滴定板的洗涤。洗涤时设法加大水流量或加大水压，让水流冲击板孔表面，洗涤效果更佳（此方法***盒较少采用）。

(1) 称取5mgHRP溶解于1ml蒸馏水中。1 U0 |) i L/ Y/ ?. ]

(2) 于上液中加入0.2ml新配的0.1M NaIO4溶液，室温下避光搅拌20分钟。: | }% L" N7 ?4 e2 g

(3) 将上述溶液装入透析袋中，对1mM PH4.4的醋1酸钠缓冲液透析，4℃过夜。

(4) 加20μl 0.2M PH9.5碳酸盐缓冲液，使以上醛化桯RP的PH升高到9.0~9.5，然后立即加入10mg IgG(抗1体，或SPA5mg)在1ml 0.01M碳酸盐缓冲液中，室温避光轻轻搅拌2小时。9 U# ^amp; ~. [7 @

(5) 加0.1ml新配的4mg／ml NaBH4液，混匀，再置4℃2小时。# B T" n; v7 C" F* H5 }

(6) 将上述液装入透析袋中，对0.15M PH7.4 PBS透析，4℃过夜。0 m# a# G5 V# x， S7 p， B

　　其余步骤(纯化)同戊二1醛标记步骤的(6)、(7)、(8)。

3）结果判定：

　　除标记物IgG量的计算，略有不同以外，其余均同戊二1醛法。5 {% ^% U/ T X- Z0 U- a

　　IgG量(mg／ml)＝(OD280nm-OD403nm×0.3)×0.62( Q: p$ f" X， F0 }; s

4）***及器材:1 x- R T/ e$ i" Q

(1) 0.1M NaIO4：称取241mg高碘1酸钠(广州化学***厂，批号830602)溶于蒸馏水10ml中。

(2) 1mM PH4.4醋1酸钠缓冲液: ?. p" ﹨5 N) ?( K

　　 0.2M NaAc (1.361克／50ml) 3.7ml r% g; oamp; m2 r7 t4 O

　　 0.2M HAc (0.601ml／50ml) 6.3ml

　 　加蒸馏水至2，000ml。

(3) 0.2M PH9.5碳酸盐缓冲液:3 ?! ﹨$ z* p7 ]" gamp; X. E) z( f

　　　　　　　Na２CO３ 0.32克; s3 C. i! A5 q1 G/ w4 {

　　　　　　　NaHCO３ 0.586克: H% E M! O w- M

　　　　　　　加蒸馏水至50ml

　　再用蒸馏水作20倍稀释，即成0.01M PH9.5的碳酸盐缓冲液。

(4) NaBH４溶液(4mg／ml):

　　临用时称取NaBH４4mg溶于1ml蒸馏水中。 h( i* [6 J， H% T

(5) 其它的***及器材可参见戊二1醛标记法。