过度染色
1. 没有有效封闭内源性过氧化物酶。
2. 不完全脱蜡。
3. 过度***粘附。
4. 一抗稀释度不当。
5. 蛋白质非特异性结合。
不染色
1. 忘记加一抗、生物素化二抗或亲合素-HRP。
2. 处理过程中抗原***。
3. 固定不当。
4. 用含叠氮钠洗涤液。
5. 操作过程中样品彻0底干燥。
6. 未按操作程序操作。
染色较弱
1. 加免0疫***前没有将洗涤液去掉。
2. 抗0体稀释不当。
3. 显色前底物放置时间过长。
4. 过氧0化氢的***作用。
操作步骤
石蜡切片
1. 脱蜡：二甲0苯，室温，2 次，每次 5～10min。
2. 水合 100%、100%、95%、90%、80%、70%乙醇、蒸馏水，每级 3min。
3. 在洗涤缓冲液中润洗 10min。
4. 如有必要，封闭内源性过氧化物酶（含 0.3% H2O2 无水甲0醇）
5. 继续通用步骤。
冰冻切片
1. 空气中干燥切片，至少 1hr
2. 用前用合适的固定液固定，如果要延长保存时间，固定后在空气中干燥 1hr。 单独包装在铝箔袋中，–70°C 干燥保存，用前从冰箱取出，室温放置至少 1hr。
3. 浸入洗涤缓冲液中 10～15min。
4. 如有必要，封闭内源性过氧化物酶（含 0.3% H2O2 无水甲0醇）。
5. 继续通用步骤。
内源性碱性活性在很多细胞和***中很强，封闭液PBS BSA，如膀胱上皮细胞、卵0巢固有层、shen脏和唾液腺。小0肠碱性磷酸酶常见于在小0肠上皮细胞的刷状缘；人0胎0盘的碱性磷酸酶常见于胎0盘合体滋养层细胞的微绒毛；在细胞涂片中，碱性磷酸酶见于嗜中性分割细胞，嗜中性带细胞，和嗜中性晚幼粒细胞。碱性磷酸酶也见于慢性和急性粒细胞白0血病以及某些嗜中性粒细胞白0血病反应。
封闭液PBS BSA-博特龙公司由苏州博特龙技术有限公司提供。苏州博特龙技术有限公司坚持“以人为本”的企业理念，拥有一支高素质的员工***，力求提供更好的产品和服务回馈社会，并欢迎广大新老客户光临惠顾，真诚合作、共创美好未来。博特龙——您可信赖的朋友，公司地址：江苏省苏州市相城开发区观塘路1号西交大漕湖科技园C幢810，联系人：刘总。