蛋白质纯化-友名生物技术

蛋白质测定***

（1）标准蛋白质溶液：用标准的结晶牛血1清清蛋白（bsa）或标准酪蛋白，配制成10mg/ml的标准蛋白溶液，可用bsa浓度1mg/ml的a280为0.66来校正其纯度。如有需要，标准蛋白质还可预先用微量凯氏定氮法测定蛋白氮含量，计算出其纯度，再根据其纯度，称量配制成标准蛋白质溶液。牛血1清清蛋白用H2O 或0.9%N***配制，酪蛋白用0．05NaOH配制。

（2）双缩脲***：称以1.50克***铜（CuSO4?5H2O）和6.0克酒石酸钾钠（KNa***H4O6?4H2O），用500毫升水溶解，在搅拌下加入300毫升10% NaOH溶液，用水稀释到1升，贮存于塑料瓶中（或内壁涂以石蜡的瓶中）。此***可长期保存。若贮存瓶中有黑色沉淀出现，则需要重新配制。

植物表达系统

植物能够表达来自动物、***、病毒以及植物本身的蛋白质易于大规模培养和生产，且在***表达与修饰及安全性方面有特别的优势，因此利用植物生产外源蛋白质的研究展现了极其诱人的前景。多种抗1体、酶、激紊、血浆蛋白等都已通过***工程的手段在植物的叶、茎、根、果实、种子以及植物细胞和器1官中得到表达，然而提取与纯化始终是大规模利用植物生产重组蛋白的主要障碍。Doloressa等据内质网和内质网信号肽在蛋白质合成中的作用，蛋白质纯化，把3种重组蛋白，即嗜热***来源的木聚糖酶、水母的绿色荧光蛋白和Human placenta分泌的碱性磷酸酶(SEAP)***到质外体中，通过根分泌和叶分泌途径获得表达，从而建立了两种新的重组蛋白表达系统——植物根分泌和叶分泌，简化了分离和纯化程序，为利用转基yin植物大规模生产重组蛋白提供了潜在的途径。虽然利用植物表达、生产外源性蛋白起步较晚，但已经能够利用植物生产多种食用以及工业用蛋白及酶制剂。

蛋白表达系统分类及优劣分析

原核蛋白表达系统既是***常用的表达系统，也是经济实惠的蛋白表达系统。原核蛋白表达系统以大肠杆1菌表达系统为代表，具有遗传背景清楚、成本低、表达量高和表达产物分离纯化相对简单等优点，缺点主要是蛋白质翻译后缺乏加工机制，如二硫键的形成、蛋白糖基化和正确折叠，得到具有生物活性的蛋白的几率较小。

酵母蛋白表达系统以甲1醇毕赤酵母为代表，具有表达量高，可诱导，糖基化机制接近高等真核生物，分泌蛋白易纯化，易实现高密发酵等优点。缺点为部分蛋白产物易降解，表达量不可控。

哺乳动物细胞和昆虫细胞表达系统主要优点是蛋白翻译后加工机制比较接近体内的天然形式，相对容易保留生物活性，缺点是表达量通常较低，稳定细胞系建立技术难度大，生产成本高。