





***液相色谱法实验结果分析
现代色谱分析法是有效而快速的分离、分析手段,既可用于定性分析,又可用于定量分析。***液相色谱法与气相色谱法的定性分析和定量分析方法(包括测定方式和计算方法)相同。在定性分析中,有用纯物质对照的色谱鉴定法,还有收集馏分与化学方法或其他仪器分析方法联用的非色谱鉴定法;在定量分析中,***液相色谱,可以用峰高或峰面积以内标法、外标法或***化法定量,并与微机联用作为现代化的分析工具。
定性分析
色谱分析法定性分析的目的就是确定每个色谱峰代表什么组分,从而确定由这些组分所构成的混合物试样的组成。常用的主要定性方法有色谱鉴定法和非色谱鉴定法两种。
1.色谱鉴定法定性
色谱鉴定法就是用纯物质对照定性,这是气相和***液相色谱法中常用的方便的一种定性方法,可以和定量测定操作同时进行。
(1)利用保留值定性
在色谱条件一定的情况下(包括柱长、柱内径、固定相、柱温、流动相及流速等),每一种物质都有其一定的保留值(包括保留时间、保留体积、调整保留时间、调整保留体积等),一般不受其他组分的影响,可以作为定性的根据。此法又称为纯物质对照定性。
在相同的色谱条件下,先测定未知物中每个色谱峰的保留时间或保留距离,再将要测的某纯物质注入色谱仪,对照比较两者的保留值,如果两者的保留值相同,就可判定该未知物与已知纯物质是同一种物质。
(2)利用加入纯物质增加峰高法定性
在稳定的色谱条件下,为了区分两个保留值(保留时间或保留距离)非常接近的组分,可以将某纯物质直接加入到试样中,再注入色谱仪,如果某组分峰的峰高增加了,表明这个色谱峰就是加入的纯物质。此法又称为纯物质追加法定性。
色谱鉴定法定性需要有纯物质对照,在没有纯物质时,可以用非色谱鉴定法定性。
***液相色谱仪操作进样阀的问题
1、进样量的控制。
用进样阀来进样时,阀内的样品环是定量的,***液相色谱多少钱,(一般分析型进样阀的样品环体积为20ul),由于进样时,***到进样阀内的样品溶液在样品环的管路中有径向的速度梯度(即管轴处比管壁处的液流速度快)。因此,要想使样品环中充满样品溶液,从而使用进样阀来准确地定量,则必须使进样量大于样品环体积的2倍。
2、进样阀的清洁问题。
如果样品环中有上次进样时样品的残留,必然会污染下次***进的样品,为防止这种现象的发生,应按步骤操作。
3、进样阀溢流管的堵塞。
有时,进样阀的溢流管会发生堵塞现象,向进样阀内***样品时,***针推不动。此故障是由于溢流管的堵塞所致。堵塞的原因多半是由于溶解样品的流动相用的是盐溶液,而其中的盐在溢流管的排空端口处结晶所致。此时,可用小烧杯盛少量蒸馏水对溢流管口稍加浸泡,端口处盐的结晶就能被溶解掉,故障排除。如能在每次进样完成之后,***液相色谱哪家效果好,用蒸馏水反复冲洗至溢流管中的盐分全部冲出,则可避免此故障的发生。
HPLC的动力系统:泵
泵是HPLC的动力系统。气相色谱的动力,实际上是钢瓶中气体的压力。而液体,它只有通过泵的转动而使之流动。
我们做一个类比:血液类比成流动相,心脏类比成泵。血管类比成各不锈钢管。那么,血液在心脏作为动力系统,流经着身体的各个系统。如果心脏跳得快点,那么血流量加大,那么血压升高。同样,泵流速提高,流动相流量增大,那么色谱系统压力增大;如果血管被压迫半堵了,那么同样的心跳速度,压力也会增大。同样道理,如果色谱系统被污染,那么污染物堵在色谱柱头,或者各连接口等,那么泵同样的流速,就有可能压力变大。***液相色谱主要出问题的就是压力莫名地增大,一般认为是色谱系统被污染而堵,解决的方法就是查看各个部件,或者清洗流路等。
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