连续色谱层析简介
众所周知,传统色谱分离技术是采用固定的色谱塔进行,***入一定量物料,然后采用洗脱剂不断洗脱,在同一出口在不同时间段就可接到不同的产品组分,此过程明显费时费力;而连续色谱分离技术则是利用不同物质在由固定相和流动相构成的体系中具有不同的分配系数,当两相作相对运动时,这些物质随流动相一起运动,并在两相间进行反复多次的分配,从而使各物质达到分离。在实际生产中,连续流层析可获得更高的产量,且成本更低,这是通过降低Protein A 填料用量和缓冲液消耗量实现的,由于操作稳定,其可更好地保证产品质量的一致性,并显著提高下游纯化的产量。传统色谱分离方式通常是单一色谱柱序列上样和洗脱,这就明显限制了介质的利用程度,而连续色谱层析技术平行采用多根色谱柱平行上样和洗脱,这种连续上样的方式无疑能够i大化介质的利用率。
连续层析提高生产效率 随着细胞培养技术的迅猛发展,蛋白表达量不断增加以及新兴的连续灌流培养技术的发展对下游纯化效率提出越来越高的要求。批次层析越来越难以满足生产的需求,而连续层析由多根串联的层析柱组成,因为第二根柱子可以承接并吸附从根层析柱流穿的,因此根柱子可以持续上样到更高的蛋白穿透从而显著提高层析柱的使用载量,进而提高介质利用率,降低生产成本。连续层析可以极大提高设备的利用率,缩短生产周期,还可以减少缓冲液的消耗。
层析系统的技术原理
其主要过程是:由泵推动溶液;各种阀门控制溶液流向,或者进样,或者洗脱层析柱;样品经过层析柱并洗脱后,以样品各组分在流动相和固定相(层析介质)中的分配系数不同而保留不同,从而分开;不同组分经过各种在位检测器,如紫外检测器、电导检测器、pH检测器等确定各组分的位置和浓度;各组分由收集器自动收集。
其中,泵是层析系统的心脏,用以推动溶液流动,DuoFlow的泵是双柱塞双泵,可提供稳定,双向变速可调的液流,并可根据层析柱的不同而提供一定的压力。检测器是层析系统的眼睛,必须具有足够的灵敏度。在层析中需要检测的指标有 pH,离子强度,紫外/可见光吸收值,折光度,荧光值等。