





当PCR循环阶段完成后,PCR扩增仪通常被设置为将样品“保持”在4℃,直到用户将其从仪器中取出。
将样品块冷却到这个温度,特别是长时间的冷却,会给样品块带来不必要的压力,小型pcr仪,并有可能使其寿命缩短10倍之多。为了避免这种情况,可以在程序结束后立即取出样品,pcr检测仪,或者将仪器设定为在室温下保持样品。
这对PCR产物的影响应该是小的,因为DNA在室温下是相对稳定的。此外,在低温下保持样品块,可能会导致冷凝水的积累。这不仅可能导致块状物本身的腐蚀,还可能损坏仪器内部的电气元件。
因此,当仪器不使用时,将PCR扩增仪的盖子打开,让任何积聚的冷凝水蒸发,是一个好的做法。

PCR技术的原理类似于DNA的天然过程,其特异性依赖于靶序列两端互补的寡核苷酸引物,由变性-退火-延伸三个基本反应步骤构成 [2] 。1. 模板DNA的变性模板DNA经加热至93℃左右一定时间后,使模板DNA双链或经PCR扩增形成的双链DNA解离,使之成为单链,以便它与引物结合,为下轮反应作准备。2. 模板DNA与引物的退火(复性)模板DNA经加热变性成单链后,温度降至55℃左右,引物与模板DNA单链互补序列配对结合。3. 引物的延伸DNA模板-引物结合物在TaqDNA聚合酶的作用下,以dNTP为反应原料,靶序列为模板,按碱基配对与半保留原理,合成一条新的与模板DNA链互补的半保留链。

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