293t细胞-细胞-英瀚斯生物科技公司

1、操作步骤 [方法一]：

(1) 细胞培养：取 6 孔培养板 (或用 35 mm 培养皿)，向每孔中加入 2 mL 含 1～2×105 个细胞培养液，37℃ CO2 培养至 40%～60% 汇合时 (汇合过分，转染后不利筛选细胞)。

(2) 转染液制备：在聚苯乙稀管中制备以下两液 (为转染每一个孔细胞所用的量)A 液：用不含培养基稀释 1-10 μg DNA，293t细胞，终量 100μL，细胞实验室，B 液：用不含培养基稀释 2-50 μgLR，终量 100μL，轻轻混合 A、B 液，室温中置 10-15 分钟，细胞，稍后会出现微浊现象，但并不妨碍转染 (如出现沉淀可能因 LR 或 DNA 浓度过高所致，应酌情减量)。

(3) 转染准备：用 2 mL 不含培养液漂洗两次，再加入 1 mL 不含培养液。

(4) 转染：把 A/B 复合物缓缓加入培养液中，摇匀，37℃ 温箱置 6～24 小时，吸除无转染液，换入正常培养液继续培养。

(5) 其余处理如观察、筛选、检测等与其它转染法相同。

注意：转染时切勿加，对转染效率有很大影响。

选择实验外包公司需要注意哪些事项？

1. 实地考察

可以到公司实地考察一下实验室，看一下实验室环境、设备仪器情况，是否能满足实验方案所需条件。能整体承接课题，动物细胞。一些大型仪器公司不一定有，看有没有高校平台资源渠道共享。确保是真实进行实验的，这样后续实验结果数据也比较可靠。

2. 方案评估

实验合作前期一般会进行所需实验内容的评估，来确定终实际实验方案和报价。方案评估可以看出外包团队的性。一个可靠的外包公司会对方案提出针对性的建议，评估各项实验是否能做，以及根据预算情况和实际操作对细节适当地调整。任何实验都是有不确定性的，但是前期敲定好方案能为后续实际开展实验打下良好基础，细胞融合实验报告，也会省去许多隐患和麻烦。

平板克l隆形成实验基本步骤::

1、取对数生长期的各组细胞，分别用0.25%胰 蛋白酶消化并吹打成单个细胞，并把细胞悬浮在10%胎牛的DMEM培养液中备用。

2、将细胞悬液作梯度倍数稀释，每组细胞分别以每皿50、100、200 个细胞的梯度密度分别接种含10mL 37预温培养液的皿中，并轻轻转动，使细胞分散均匀。置37团5% CO2及饱和湿度的细胞培养箱中培养2~3周。

3、经常观察，当培养皿中出现肉眼可见的时，终止培养。弃去上清液，用PBS小心浸洗2次。加4%多聚甲醛固定细胞5mL固定15分钟。然后去固定液，加适量GIMSA应用染色液染10~30分钟，然后用流水缓慢洗去染色液，空气干燥。

4、将平皿倒置并叠加一张带网格的透明胶片，用肉眼直接计数，或在显微镜(低倍镜)计数大于10个细胞的数。后计算形成率。形成率= (数/接种细胞数) x100%平板形成试验方法简单，适用于贴壁生长的细胞。适宜底物为玻璃的、塑料瓶皿。试验成功的关键是细胞悬液的制备和接种密度。细胞一定要分散得好，不能有细胞团，接种密度不能过大。平板形成试验方法简单，适用于贴壁生长的细胞。适宜底物为玻璃的、塑料瓶皿。试验成功的关键是细胞悬液的制备和接种密度。细胞- -定要分散得好，不能有细胞团，接种密度不能过大。