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恒温扩增试剂盒有哪些常用酶

TMA相关酶

依赖转录介导扩增(Transcription mediated amplification， TMA)的扩增模板为RNA或单链DNA，检测的扩增产物为RNA，详细原理可参考转录介导的核酸扩增技术小结。该体系所用酶有两种：M-MLV逆转录酶：用于模板RNA逆转录成DNA，并在逆转录过程中通过引物引入转录启动子序列，用于后续转录过程；T7 RNA聚合酶：以逆转录形成的DNA为模板，转录合成检测产物RNA。

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NEAR相关酶

切口酶扩增反应(Nicking Enzyme Amplification Reaction， NEAR)是一种基于切刻内切酶切割特性的恒温扩增方法，详细原理可参考啥黑科技可10分钟完成核酸分子检测？。其使用的酶有两种：切刻内切酶：如Nt.BstNBI切刻内切酶，该类酶不同于常规限制性内切酶，其识别特定序列后仅在DNA其中一条链上切割形成缺口，并暴露出游离的3’端；DNA聚合酶：如Vent (exo-) DNA聚合酶或Bst DNA聚合酶，用于DNA链合成，同时具有链置换功能。

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逆转录酶逆转录酶又称反转录酶，是一种RNA介导的DNA聚合酶，其反应过程中体现出三种功能为：以RNA作为模板合成互补DNA链 (complementary DNA， cDNA)，DNA型WLRB8204KIT试剂盒公司，形成RNA:cDNA杂交链；发挥RNase H活性，基础型WLRB8204KIT试剂盒公司，降解RNA:DNA杂交链中的RNA模板；以cDNA作为模板合成第二链DNA，WLRB8204KIT试剂盒公司，形成双链DNA（如下图）。其中，RNaseH活性是逆转录酶的一个内在特性，可在合成过程中同时切割RNA:cDNA杂合链中的RNA模板，MIRAWLRB8204KIT试剂盒公司，该特性可能降低逆转录效率，因此在实际应用中，常采用人工改造后的低或无RNase H活性的逆转录酶。常用的逆转录酶有AMV和M-MLV，AMV分离自禽类成髓细胞瘤病毒(Avian Myeloblastosis Virus， AMV)，M-MLV逆转录酶分离自莫洛尼氏鼠病毒(Moloney Murine Leukemia Virus， MMLV)，前者热稳定性优于后者，但AMV逆转录酶的RNaseH活性也更强，不利于长片段cDNA合成。市面上多使用经基因工程改造过的M-MLV逆转录酶，其热稳定性改进，可在50℃左右工作，同时RNase H活性进一步减弱，提高了其逆转录效率。