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如果在无模板对照中观察到假阳性结果,则通常是由污染引起的。我们建议区分***配制区和扩增分析区。在使用任何扩增后打开反应管的终点检测方法时,必须采用严格的污染控制措施。要排除或清除污染,我们建议用消毒液或 75%的酒精对工作区域进行消毒,并使用新的扩增***(溶解剂等)。可能需要重复几次清洁,MIRA恒温扩增***盒代理商,才能完全清除污染。
恒温快速扩增***盒常用酶原料有哪些?
逆转录酶逆转录酶又称反转录酶,是一种RNA介导的DNA聚合酶,其反应过程中体现出三种功能为:以RNA作为模板合成互补DNA链 (complementary DNA, cDNA),形成RNA:cDNA杂交链;发挥RNase H活性,降解RNA:DNA杂交链中的RNA模板;以cDNA作为模板合成第二链DNA,形成双链DNA(如下图)。其中,RNaseH活性是逆转录酶的一个内在特性,可在合成过程中同时切割RNA:cDNA杂合链中的RNA模板,该特性可能降低逆转录效率,因此在实际应用中,常采用人工改造后的低或无RNase H活性的逆转录酶。常用的逆转录酶有AMV和M-MLV,AMV分离自禽类成髓细胞瘤病毒(***ian Myeloblastosis Virus,RPA恒温扩增***盒代理商, AMV),M-MLV逆转录酶分离自莫洛尼氏鼠病毒(Moloney Murine Leukemia Virus, MMLV),前者热稳定性优于后者,但AMV逆转录酶的RNaseH活性也更强,恒温扩增***盒代理商,不利于长片段cDNA合成。市面上多使用经***工程改造过的M-MLV逆转录酶,RNA型恒温扩增***盒代理商,其热稳定性改进,可在50℃左右工作,同时RNase H活性进一步减弱,提高了其逆转录效率。
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NEAR相关酶
切口酶扩增反应(Nicking Enzyme Amplification Reaction, NEAR)是一种基于切刻内切酶切割特性的恒温扩增方法,详细原理可参考啥黑科技可10分钟完成核酸分子检测?。其使用的酶有两种:切刻内切酶:如Nt.BstNBI切刻内切酶,该类酶不同于常规限制性内切酶,其识别特定序列后仅在DNA其中一条链上切割形成缺口,并暴露出游离的3’端;DNA聚合酶:如Vent (exo-) DNA聚合酶或Bst DNA聚合酶,用于DNA链合成,同时具有链置换功能。
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