




恒温快速扩增***盒常用酶原料
尿DNA糖基化酶尿DNA糖基化酶(UDG酶)又称尿-N-糖基化酶(UNG酶),可水解含尿的单链和双链DNA释放出游离尿,而对RNA无活性,与dUTP搭配使用,可建立成PCR防污染体系。其原理如下:在PCR体系中将dTTP部分或全部替换为dUTP后,使得反应生成含有dU碱基的扩增产物,这些扩增产物不同于天然模板,在进入含有UDG酶的反应体系时,MIRAWLRE8208KIT***盒,可被UDG酶识别并切割尿碱基与糖磷酸骨架间的N-糖基键,而经切割后的DNA链在碱性或高温条件下易于断裂降解,从而失去被当作模板再扩增的能力,因此可防止扩增子污染(如下图)。市面上的UDG酶主要有普通型和热敏型,MIRAWLRE8208KIT***盒价格,其中热敏型UDG酶在室温条件下即可催化反应,50℃以上加热可使其灭活,防止其降解后续PCR形成的含dU扩增产物。虽然UDG/dUTP体系具有防污染功能,但在实际测试中还得兼顾PCR的效率和灵敏度。一方面需确保PCR扩增产物掺入足够量的尿碱基,从而可被UDG有效切割;另一方面也需要保证反应体系添加的dUTP不会明显影响PCR效率,因此dTTP和dUTP的佳比例需通过优化确定。
恒温扩增***盒产品特点
产品特点:
1.高特异性,由于同时使用4-6条特异引物,所以特异性比RT-PCR更高。
2.高扩增效率,扩增效率可达到10E9-10E10,比PCR灵敏一个数量级,可检测到单拷贝的RNA分子
3. 65℃左右完成RT和LAMP扩增,不需要贵重的热循环仪。
4. 即开即用,包含了除引物和模板RNA外的所有成份,十分方便。
5. 肉眼检测扩增结果,MIRAWLRE8208KIT***盒多少钱,不需要昂贵的电泳、荧光PCR等仪器。
6. 提供扩增对照,便于在遇到困难时分析原因。
恒温扩增***盒操作步骤
提前30分钟将***盒所需组分取出,室温融化。鹿荡混匀。
1).每个干粉反应管加入29.4 uL Abuffer (注意: Abuffer需完全融化混匀,否则会对实验效果产“生影响) ; 1.每个干粉反应管加入29.4 uLAbuffer (注意: Abuffer需完全融化混匀,否则会对实验效果产生影响) ;
2.每个反应管分别加入2 uL上游引物、2 uL下游引物和0.6 μ探针(引物和探针浓度为10 μM ,对于多个反应、步骤1和步骤2可以混合后再分装至反应管中)
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