




PCR革新技术-英国TwistDx Inc公司开发恒温扩增RPA
英国TwistDx Inc公司开发的重组酶聚合酶扩增(Recombinase Polymerase Amplification,RPA)--被称为是可以替代PCR的核酸检测技术,目前新的等温扩增检测技术。以此为基础的TwistAmp? 核酸扩增产品,能够在15分钟内进行常温下的单分子核酸检测。该技术对硬件设备的要求很低,特别适合用于体外诊断、兽医、食品安全、生物防御和农业等领域。
常规PCR必须经过变性、退火、延伸三个步骤,而PCR仪本质上就是一个控制温度升降的设备。RPA反应的适宜温度在37°C - 42°C之间,无需变性,在常温下即可进行。这无疑能大大加快PCR的速度。此外,由于不需要温控设备,RPA可以真正实现便携式的快速核酸检测。
据介绍,RPA检测的灵敏度很高,能够将痕量的核酸(尤其是DNA)模板扩增到可以检出的水平,从单个模板分子得到大约1012扩增产物。而且RPA还用不着复杂的样品处理,适用于无法提取核酸的实地检测。
RPA不仅可以对扩增产物进行终点检测,还可以对扩增过程进行实时监控,甚至可以通过试纸条(侧流层析试纸条LFD)读取结果。
目前,TwistAmp? ***盒的扩增子长度在500bp以内。不过,经过特别优化的RPA扩增,也可以生成更长的扩增产物,或者减慢扩增速度(便于定量),甚至在更低的温度下进行反应。
TwistDx***盒的相关概述
RPA 作为颠覆 PCR 的革命性方法的突出地位源于其特定的反应成分(表 1)和机制。 对于成功的 RPA 分析,细微差别取决于内在因素、引物、探针和核酸模板的设计; 并且与外在因素有关,如反应温度和搅拌、对错配的耐受性、和模板DNA。 此外,进口nfo***盒报价,RPA 过程中的核酸标记、RPA 扩增子纯化和扩增后处理也是 RPA 检测成功的重要细节。 本节提供从 RPA 文献中总结的这些实用信息,进口nfo***盒报价,作为 RPA 检测设计的指南。

RPA技术
01 特别快,传统PCR要45分钟,因为要反复升温降温。RPA由于是恒温,所以只需要3-10分钟。
02 灵敏度高,因为是高度定向扩增,所以样品即便有点儿杂质也OK,免除了前处理环节,尽量多的保留了样本。
03 温度控制要求低,一般是加热到40℃,但是在紧急情况下,进口nfo***盒报价,贴在人身上用***的体温36℃、37℃也没问题。甚至在室温25℃,nfo***盒报价,也是可以运行,就是慢点儿,要等一个小时而已。
04 适用性强,面对RNA病毒,直接在***里加入逆转录酶就好,一锅端。

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