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RPA技术的基本原理

RPA技术主要依赖于三种酶：能结合单链核酸(寡核苷酸引物)的重组酶、单链DNA结合蛋白(SSB)和链置换DNA聚合酶。这三种酶的混合物在常温下也有活性，反应温度在37°C左右。

重组酶与引物结合形成的蛋白-DNA复合物，能在双链DNA中寻找同源序列。一旦引物***了同源序列，就会发生链交换反应形成并启动DNA合成，对模板上的目标区域进行指数式扩增。被替换的DNA链与SSB结合，防止进一步替换。在这个体系中，由两个相对的引物起始一个合成事件。整个过程进行得非常快，USTAR01报价，一般可在十分钟之内获得可检出水平的扩增产物。RPA扩增的基础体系(TwistAmp? Basic)含有DNA扩增所需的所有***，我们只要准备好引物和模板就行。扩增结果可以通过凝胶电泳进行终点检测，产物纯化后可用于下游研究。

在这个基础体系中添入不同的酶和探针，就可以实现多样化的RPA应用。举例来说，USTAR01，TwistAmp? exo结合了的exo探针技术和核酸外切酶III，能实现数据的实时读取，就像荧光定量PCR一样。不过反应终点的扩增子总量有所减少，适合获得强荧光信号进行动力学分析，不适合终点检测(比如跑胶)。将exo探针技术、核酸外切酶III和逆转录酶结合起来，可以一步实现RNA模板的实时扩增。

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自 1983 年出现经典聚合酶链反应 (PCR) 方法以来，核酸扩增已渗透到生命科学的各个领域。 然而，尽管具有基本的影响，但 PCR 已被限制在实验室的范围内，因为它需要一套复杂的热循环系统，其限制了在资源匮乏环境中的外部应用。新的等温扩增策略正在寻求通过在恒温下提供核酸来突破传统的实验室限制。在这些方法中，重组酶聚合酶扩增 (RPA) 是发展快的方法之一，尽管它的开始相对较晚，进口USTAR01代理商，但是却经历了快速的普及和市场化。

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既然检测缺乏准确性，为什么我们不只采用核酸检测进行诊断呢？这是因为核酸检测比检测费事、费力得多。目前市场上的核酸检测需要精密的仪器和人员来操作，需要2个小时左右的才能出结果。而测试则相对便捷，可以通过指尖采血，滴加稀释液，15分钟后便可通过观察反应线出现与否来判断是否。

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