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NEAR相关酶

切口酶扩增反应(Nicking Enzyme Amplification Reaction， NEAR)是一种基于切刻内切酶切割特性的恒温扩增方法，详细原理可参考啥黑科技可10分钟完成核酸分子检测？。其使用的酶有两种：切刻内切酶：如Nt.BstNBI切刻内切酶，该类酶不同于常规限制性内切酶，其识别特定序列后仅在DNA其中一条链上切割形成缺口，荧光型恒温扩增***盒，并暴露出游离的3’端；DNA聚合酶：如Vent (exo-) DNA聚合酶或Bst DNA聚合酶，用于DNA链合成，同时具有链置换功能。

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尿DNA糖基化酶尿DNA糖基化酶(UDG酶)又称尿-N-糖基化酶(UNG酶)，荧光型恒温扩增***盒报价，可水解含尿的单链和双链DNA释放出游离尿，而对RNA无活性，与dUTP搭配使用，可建立成PCR防污染体系。其原理如下：在PCR体系中将dTTP部分或全部替换为dUTP后，使得反应生成含有dU碱基的扩增产物，这些扩增产物不同于天然模板，在进入含有UDG酶的反应体系时，可被UDG酶识别并切割尿碱基与糖磷酸骨架间的N-糖基键，而经切割后的DNA链在碱性或高温条件下易于断裂降解，从而失去被当作模板再扩增的能力，因此可防止扩增子污染（如下图）。市面上的UDG酶主要有普通型和热敏型，其中热敏型UDG酶在室温条件下即可催化反应，50℃以上加热可使其灭活，防止其降解后续PCR形成的含dU扩增产物。虽然UDG/dUTP体系具有防污染功能，但在实际测试中还得兼顾PCR的效率和灵敏度。一方面需确保PCR扩增产物掺入足够量的尿碱基，从而可被UDG有效切割；另一方面也需要保证反应体系添加的dUTP不会明显影响PCR效率，因此dTTP和dUTP的佳比例需通过优化确定。

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RPA相关酶

重组酶聚合酶扩增技术(Recombinase Polymerase Amplification， RPA)是一种多酶协作的反应体系，详细原理可参考充满想象力的恒温扩增技术:RPA、RCA、SDA、HDA。该体系反应酶包含三种：重组酶：可与引物结合形成复合体，荧光型恒温扩增***盒公司，***至与引物同源的靶序列，促使引物与模板结合，同时帮助DNA解链，以便启动扩增；单链DNA结合蛋白：可与被置换出的DNA单链结合，稳定单链结构；DNA聚合酶：如Bsu DNA聚合酶，用于DNA链合成，同时具有链置换功能。对于RNA模板，需在反应中加入逆转录酶形成RT-RPA体系；若利用标记探针进行检测，荧光型恒温扩增***盒哪家好，还需加入核酸酶对探针序列进行切割，常用核酸酶有核酸内切酶 IV(Endonuclease IV， nfo)和核酸外切酶 III(Exonuclease III， exo)，或者可与CRISPS/Cas系统搭配使用。