




PCR革新技术-英国TwistDx Inc公司开发恒温扩增RPA
英国TwistDx Inc公司开发的重组酶聚合酶扩增(Recombinase Polymerase Amplification,TwistAmp多少钱,RPA)--被称为是可以替代PCR的核酸检测技术,进口TwistAmp多少钱,目前新的等温扩增检测技术。以此为基础的TwistAmp? 核酸扩增产品,能够在15分钟内进行常温下的单分子核酸检测。该技术对硬件设备的要求很低,特别适合用于体外诊断、兽医、食品安全、生物防御和农业等领域。
常规PCR必须经过变性、退火、延伸三个步骤,而PCR仪本质上就是一个控制温度升降的设备。RPA反应的适宜温度在37°C - 42°C之间,无需变性,在常温下即可进行。这无疑能大大加快PCR的速度。此外,由于不需要温控设备,RPA可以真正实现便携式的快速核酸检测。
据介绍,RPA检测的灵敏度很高,能够将痕量的核酸(尤其是DNA)模板扩增到可以检出的水平,从单个模板分子得到大约1012扩增产物。而且RPA还用不着复杂的样品处理,适用于无法提取核酸的实地检测。
RPA不仅可以对扩增产物进行终点检测,还可以对扩增过程进行实时监控,甚至可以通过试纸条(侧流层析试纸条LFD)读取结果。
目前,TwistAmp? ***盒的扩增子长度在500bp以内。不过,经过特别优化的RPA扩增,也可以生成更长的扩增产物,或者减慢扩增速度(便于定量),甚至在更低的温度下进行反应。
重组酶介导等温核酸扩增技术原理
RAA技术 是重组酶介导等温核酸扩增技术(Recombinase Aided Amplification)的简称,是一种利用重组酶、单链结合蛋白、DNA聚合酶在等温条件下(佳温度37℃)进行核酸扩增的技术。具体原理为:重组酶、单链结合蛋白、引物形成复合体扫描双链DNA,在与引物同源的序列处使双链DNA解旋,单链结合蛋白(SSB)防止单链DNA复性,在能量和dNTP存在的情况下,进口TwistAmp多少钱,由DNA聚合酶完成链的延伸,5-20分钟就可实现仪器扩增。

TwistDx***盒
我国主要的几种检测***盒都是基于RT-PCR原理。因为需要检测的病毒样本浓度有高有低,高的容易检测,低浓度就会漏掉。所以PCR的方法就把病毒***扩增很多倍,达到可以检测出来的浓度。基本操作如下:
01 收集咽拭子等病毒样本,通过***打碎保护病毒的蛋白质壳子,萃取病毒RNA。一方面是萃取,另一反面,进口TwistAmp多少钱,打碎之后就没有了性,相对安全一些。
02 由于这次新冠是单链RNA病毒,所以要先转换成cDNA。这个可以类比像是视频文件,mp4,rmvb,***i这些都是常见格式,同一个视频不同格式,意思都一样,可以互相转换。
03 常规PCR反应,加热到94℃把DNA拉链拉开,之后再55℃-60℃让引物,就是拉链扣分别套在两条拉链上,再升温到72℃让拉链自己,用左拉链做模板造一个右拉链,用右拉链做模板造一个左拉链。这样折腾一次为一个循环,RNA数量翻一倍。之后再折腾25-30次。这样就算很少量的病毒这个时候也显现出来了。

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