小鼠成骨细胞和破骨细胞共培养模型的建立
细胞之间的相互调控作用奠定基础.方法利用24 h内新生小鼠颅骨和4~8周龄成年小鼠四肢长分别分离、培养成骨细胞和破骨细胞，采用间接接触的培养模式将接种了骨sui单核细胞的玻片或骨片置入提前24 h接种了成骨细胞的培养皿中进行共培养.共培养-定时间后进行破 骨细胞抗酒石酸酸性磷酸酶(tartrate-resistant acid phosphatase，TRAP染色鉴定和骨吸收功能检测，并进一 步采用RT- PCR对破骨细胞标志酶***基质金属蛋白酶.9(MMP-9)、TRAP 和***蛋白酶K (Cathepsin K )的表达进行检测结果共培养5天后可观TRAP( )多核细胞形成13天TRAP( )多核细胞数目达到高峰;骨吸收陷窝在共培养7天后开始出现，随着培养时间的延长，陷窝面积呈增加趋势;破骨细胞标志***TRAP在共培养3天时开始表达，而MMP-9和Cathepsin K则在共培养5天后表达结论共培养体系中成骨细胞对破骨细胞调控作用显著诱导的破骨细胞具有噬骨能力，该共培养模型可用于成骨细胞和破骨细胞之间的相互调控作用研究.
成纤维细胞分离方法
1.处死孕鼠，全身置于75%酒精里浸泡，然后在超净台中用剪刀和镊子将孕鼠皮肤剪开，用另外- -组剪刀、镊子剪开腹部肌层，露出，后用第三组剪刀和镊子将小心取出放在盛有D-PBS的玻璃平皿中，细胞实验外包，冲洗去血。
2.用两把弯镊子将胚胎外的胞膜小心去除，然后夹掉头和内脏，将其余胚胎转移到一个装有30 ml D-PBS的50 ml离心管中，轻轻颠倒两次，倒掉D-PBS，再重复此步骤一次，注意要留少许D-PBS，然后将胚胎转移到另- -装有D-PBS的平皿中，并用***刀片将其细细切碎。
3. 用200 μ的移液枪反复、快速地吹打平皿中的液体，转移至15 ml离心管中，细胞实验整体外包，于4C 1500 rpm离心5分钟，倒掉上清，以10 ml胰酶重悬沉淀，放在37C水浴中消化30分钟，且每隔五分钟轻轻晃动，使之充分消化。
4.将上层细胞悬液倒入一个装有10 ml MEF生长培养基的50 ml离心管中，用200目的尼龙网过滤后，以1500 rpm离心5分钟收集细胞，再用30 ml MEF生长培养基洗涤两次。
5.细胞沉淀用15 ml MEF生长培养基重悬后进行细胞计数(- -般8只14天的胎鼠可获得2-3x107细胞)。
6. 3x106细胞悬浮于15 ml MEF生长培养基中，接种到200 ml培养瓶中。
7. 24小时后更换新鲜的MEF生长培养基。
8.细胞长满后，先用D-PBS冲洗，倒掉后加胰酶消化(此步时间不宜过长，作者- -般不超过五分钟)，按1:5传代。
9. 细胞再次长到覆盖率80-90%左右， 将其消化后，常规冻存(冻存液要现配)。
大鼠主动脉内皮细胞的分离培养
方法：分离大鼠主动脉，直接贴壁于培养皿中，荧光倒置显微镜观察细胞形态，南京细胞实验外包，免yi组化Ⅷ因子相关抗原染色鉴定细胞.结果:约24小时***块边缘有游离的 新生细胞长出，7天即融合成片.消化传代后细胞呈短梭形或三角形，单层生长，细胞实验外包费用，铺路石状，Ⅷ因子表达阳性，呈指数增殖.冻存后复苏细胞活性均超过90%.结 论:用贴壁法成功建立了大鼠血管内皮细胞体外培养方法，冻存细胞存活率高，为体外研究提供了稳定的模型.
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