PCR检测***盒反应五要素:参加PCR反应的物质主要有五种即引物、酶、dNTP、模板和Mg2
引物:引物是PCR特异性反应的关键,PCR 产物的特异性取决于引物与模板DNA互补的程度。理论上,只要知道任何一段模板DNA序列, 就能按其设计互补的寡核苷酸链做引物,利用PCR就可将模板DNA在体外大量扩增。设计引物应遵循以下原则:
1.引物碱基:G C含量以40-60%为宜,G C太少扩增效果不佳,G C过多易出现非特异条带。ATGC随机分布,避免5个以上的成串排列。
2.避免引物内部出现二级结构,避免两条引物间互补,特别是3"端的互补,否则会形成引物二聚体,产生非特异的扩增条带。
PCR原理用于扩增位于两段已知序列之间的DNA片段,PCR快速检测***厂家,类似于天然DNA的copy过程。以拟扩增的DNA分子为模板,以一对分别与模板5’末端和3’末端互补的寡核苷酸片段为引物,在DNA聚合酶的作用下,按照半保留copy的机制沿着模板链延伸直至完成新的DNA合成,重复这一过程,即可使目的DNA片段得到扩增。PCR(聚合酶链式反应)是利用DNA在体外摄氏95°高温时变性会变成单链,低温(经常是60°C左右)时引物与单链按碱基互补配对的原则结合
PCR检测***盒反应需注意事项:1.基础程序;2.扩增温度和延伸温度;3.反应时间;4.循环次数;5.PCR 反应液的配制;6.PCR技术的基本原理;7.PCR的反应动力学;8.PCR扩增产物;9.PCR反应体系与反应条件。
特点优势:1. 特异性,2. 重现性,3. 灵敏性,4. 实用性。
PCR检测***盒性能指标:1. ***盒检测特异性为100% 2. 检测***盒重现性为100% 3. 灵敏度可达到103/ml 4. 有效期为6个月
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