




PCR检测***盒反应五要素:参加PCR反应的物质主要有五种即引物、酶、dNTP、模板和Mg2
引物:引物是PCR特异性反应的关键,PCR 产物的特异性取决于引物与模板DNA互补的程度。理论上,只要知道任何一段模板DNA序列, 就能按其设计互补的寡核苷酸链做引物,利用PCR就可将模板DNA在体外大量扩增。设计引物应遵循以下原则:
①引物长度: 15-30bp,常用为20bp左右。
②引物扩增跨度: 以200-500bp为宜,PCR快速检测多少钱,特定条件下可扩增长至10kb的片段。
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PCR检测***盒而荧光定量PCR有如下显著的优点:
1、操作简单、安全、自动化程度高、1防污染。扩增和检测可以在同一管内检测,不需要开盖,不易污染;同时扩增和检测一步完成,不需要后期处理,不再需要担心污染。2、速度快、高通量,可在2-3小时完成96个样品的定量分析。
PCR检测***盒定量方法 在real-time Q-PCR中,模板定量有两种策略;相对定量和决对定量。相对定量指的是在一定样本中靶序列相对于另一参照样本的量的变化。决对定量指的是用已知的标准曲线来推算未知的样本的量。
PCR检测***盒反应五要素:参加PCR反应的物质主要有五种即引物、酶、dNTP、模板和Mg2
引物:引物是PCR特异性反应的关键,PCR 产物的特异性取决于引物与模板DNA互补的程度。理论上,只要知道任何一段模板DNA序列, 就能按其设计互补的寡核苷酸链做引物,利用PCR就可将模板DNA在体外大量扩增。设计引物应遵循以下原则:
1.引物碱基:G C含量以40-60%为宜,G C太少扩增效果不佳,G C过多易出现非特异条带。ATGC随机分布,避免5个以上的成串排列。
2.避免引物内部出现二级结构,避免两条引物间互补,特别是3"端的互补,否则会形成引物二聚体,产生非特异的扩增条带。
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