




PCR实验室是分子诊断的基础,也是进行PCR实验的必备场所。近些年,分子诊断行业快速发展,对PCR的认识又进入到了一个新的阶段,但是基于实验室的基本知识仍然是非常重要的一环。
PCR实验室注意事项——标本制备区
由于在样本混合、核酸纯化过程中可能会发生气溶胶所致的污染,可通过在本区内设立正压条件,避免从邻近区进入本区的气溶胶污染。
PCR实验室注意事项——扩增产物分析区
用过的吸头也必须放至1 mol/L HCl中浸泡后再放到垃圾袋中按程序处理,如焚烧。由于本区有可能会用到某些可致***突变和***物质,故应当注意实验人员的安全防护。
PCR实验室工作基本原则
实验室的清洁应当按***贮存和准备区→标本制备区→扩增区→扩增产物分析区的方向进行。不同的实验区域应当有其各自的清洁用具以防止交叉污染。
PCR实验室各区功能及主要设备
样品制备区:主要进行样品的保存、核酸(RNA、DNA)提取、贮存及其加入至扩增反应管和测定DNA的合成。本区主要设备有冰箱、生物安全柜、离心机、加样器、振荡器、恒温水浴等。
PCR实验室布局
PCR实验室原则上为***准备区、样品制备区、扩增区和扩增产物分析区四个单独的工作区域并设有专用走廊,各工作区域应设缓冲间,工作区与缓冲间宜安装连锁装置。
核酸扩增后产物的分析方法多种多样,如膜上或微孔板或芯片上探针杂交方法直接或酶切后琼脂糖凝胶电泳、Southern转移、核酸测序方法、质谱分析等。
实验室的气流也应从扩增前区流向扩增后区,不得逆向流动。各工作区顶部应安装紫外灯,紫外灯的波长为254nm,每20㎡一支40W的紫外灯。
PCR实验室又叫***扩增实验,PCR是聚合酶链式反应简称。是一种分子生物学技术,用于放大特定的DNA,可看作生物体外的特殊DNA。通过DNA***追系统,能迅速掌握生物体内的病毒含量,其精准度高达纳米级别。
***准备区:主要进行***的制备、分装和主反应混合液的制备。***和用于样品制作的材料应直接运送至该区,不得经过其它区域。***原材料必须贮存在本区内,并在本区内制备成所需的***。本区主要设备有天平、冰箱、离心机、加样器、振荡器等。
工作结束后,必须立即对工作区进行清洁。工作区的实验台表面应当可耐受诸如化学物质的消毒清洁作用。实验台表面的紫外照射应当方便有效。