***印迹技术服务(western blot)
***印迹(immunoblotting)又称蛋白质印迹(western blot)，它是根据抗原***的特异性结合检测复杂样品中的某种蛋白的方法。western blot是在凝胶电泳和固相***测定技术基础上发展起来的一种新的***生化技术。由于***印迹(western blot)具有SDS-PAGE的高分辨力和固相***测定的高特异性和敏***，现已成为蛋白分析的一种常规技术。***印迹(western blot)常用于鉴定某种蛋白，并能对蛋白进行定性和半定量分析。
闪晶生物为您提供******印迹(western blot)技术服务和相关的***耗材。主要实验步骤如下：
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蛋白质抽提
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实验对象为***样品，取适量（250~500mg）新鲜***样品或正确保存的***样品，加1ml含蛋白酶***剂的总蛋白抽提***（或核蛋白抽提***），匀浆后抽提总蛋白（或核蛋白）。
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实验对象为细胞样品(细胞培养)，每份样品取1×106～1×107细胞，PBS清洗细胞，去PBS加0.1ml~1ml含蛋白酶***剂的总蛋白抽提***（或核蛋白抽提***）抽提总蛋白（或核蛋白）。
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2. 蛋白质定量：按BCA蛋白质定量***盒操作说明操作，测定样品浓度。
3. 变性聚丙烯酰胺不连续凝胶电泳(SDS-PAGE):将准备好的样品液和预染蛋白marker分别上样，标准加进***个孔中，电泳分离蛋白。
4. 蛋白质转移到PVDF膜,按Bio-Rad蛋白转移装置说明组装滤纸凝胶纤维素夹层，30mA恒流条件下，4°C转移过夜。
5. western blot膜的封闭和***孵育
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膜在5％脱脂奶粉溶液中室温孵育1小时以封闭膜上的非特异结合。
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封闭过的膜加入一抗室温孵育1.5小时，抗原***结合。
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加入HRP标记的二***以结合一抗，室温孵育膜1小时。加入HRP标记的GAPDH***可同时检测GAPDH含量。
6. western blot结果检测：化学发光法检测，膜与化学发光底物孵育，经X胶片***显影。图片扫描保存为电脑文件，并用GIS1000分析软件将图片上每个特异条带灰度值的数字化。
7. western blot数据分析：目的蛋白的灰度值除以内参GAPDF的灰度值以校正误差，所得结果代表某样品的目的蛋白相对含量。
8. 提供实验报告，包括详细的实验方法及***印迹实验结果的相关数据。
更详细的操作说明 
Western Blot操作规程
western blot费用：每张膜上做一种目的蛋白和相应的内参蛋白。每张膜上可以做8个样品。每张膜的费用是：1500.00元。一抗另计，其它***免费，一抗订购时间约为3周。乘车路线：火车站坐1号地铁到终点站，然后换5号地铁坐到北桥站即可。
时间：约2－3周。
联系：master@.cn shinegene@vip. 电话：021-54460831-11