******M1 ELISA检测***盒
（货号：MA440）
本***盒用于定量检测牛奶样本中******M1残留。
检测样本：原奶、奶粉
样本前处理：
-原奶：2-8°C冷藏，离心
-奶粉：稀释
分析时间：75分钟（不包括样本前处理时间）
检测限：
-原奶：0.005ppb
-奶粉：0.05ppb
特异性：交叉反应率（%）
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分析物 |
交叉反应率 |
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******M1 |
100 |
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******M2 |
16 |
- 检测原理
本***盒在预包被特异性******M1***的微孔内进行。将******M1标准品和样本加入微孔，***次孵育时，自由的******M1分子和******M1***结合，洗板除掉所有未结合的物质。加入******-HRP偶联物进行第二次孵育，偶联物封闭所有未***次孵育时未结合的***结合位点，然后加入一定量显色底物反应以检测酶活性。加终止液终止反应，450nm波长***检测，标准品或样品中的******M1浓度与吸收光强度成反比。
2.***盒组成
微孔板：96孔，预包被******M1***。板条可拆开单独使用。
******M1标准溶液：7瓶，各1.5ml，浓度分别为：0ppt，5 ppt，10 ppt，25 ppt，50 ppt，100 ppt，250 ppt。
酶偶联物：1瓶，250ul浓缩酶偶联物。
酶偶联物稀释液：1瓶，20ml。
20X浓缩洗液：1瓶，50ml。
显色液：1瓶，15ml。
终止液：1瓶，9ml。
3.需要使用但***盒不提供的***和设备
-蒸馏水
-离心机，***好是冷冻离心机。
-20-200μl、100-1000μl移液器及吸头
-20-300μl多道移液器及吸头
-含450nm波长的***
4.注意事项
-仅用于体外检测。
-一些***内含防腐剂；终止液内含有***，具有腐蚀性；酶偶联物对身体***。
-小心操作，避免***接触皮肤、眼睛和粘膜。
5.操作和存储说明
-2-8°C冷藏保存，切勿冷冻。
-将未用完的板条用***盒提供的铝箔袋重新密封。
-切勿使用过期产品。
-不同批次***盒内的成分不能混用。
-请使用***盒内提供的说明书。
6.样本前处理步骤
6.1原奶
-必须在挤奶后24小时内检测，否则必须用***或类似物做稳定处理。
-2-8°C预冷样本，并将样本在2-8°C、离心力3000g离心10分钟。
-分离除***肪。
-所得脱脂奶直接用于检测。
-如果样本中******M1浓度在10-500ppt范围，用样本稀释液（MA444）将样本2倍稀释，以使样本的******M1浓度达到有效检测范围。从标准曲线所读值乘以稀释倍数2为样本中的***终浓度值。
-如果样本中******M1浓度在25-1250ppt范围，用样本稀释液（MA444）将样本5倍稀释，以使样本的******M1浓度达到有效范围。从标准曲线所读值乘以稀释倍数5为样本中的***终浓度值。
-如果样本中******M1浓度在10-500ppt范围，用样本稀释液（MA444）将样本10倍稀释，以使样本的******M1浓度达到有效范围。从标准曲线所读值乘以稀释倍数10为样本中的***终浓度值。
6.2奶粉
-称取10g奶粉，用蒸馏水定容至100ml。
-摇晃直至奶粉完全溶解。样本稀释倍数为10.
7．工作溶液准备
******M1标准品：即用（使用前轻摇混匀）；
酶偶联物：注意，为了收集到管内所有酶偶联物，使用前低速离心数秒钟。计算当次实验的需要量，用酶稀释液将浓缩酶偶联物1/100稀释（例如，20ul浓缩酶偶联物+1980ul酶稀释液）。稀释混匀过程不得剧烈震荡。每次吸取浓缩酶偶联物的量不得少于20ul。
洗液：用蒸馏水1：20稀释（1+19）。注意：如果出现结晶，将溶液置于室温并搅拌直至结晶完全溶解。
稀释后的洗液在室温放置24小时内有效，2-8°C放置两周内有效。
显色液：即用。显色液对光敏感，应避免光直射，避光保存。
终止液：即用。
酶稀释液：即用
8.检测步骤
8.1检测前注意事项
-检测前将所有***室温放置1小时；
-使用后立即将所有***放置于2-8°C；
-不得改变检测程序；
-不得延长或缩短孵育时间；
-孵育温度不得高于25°C或低于18°C；
-孵育过程中不得晃动酶标板；
-使用精准的移液器及吸头；
-一旦开始实验，不要间断地完成所有步骤，不要让微孔干透；
-ELISA方法结果的再现性很大程度取决于洗板过程的效率和一致性，要按照介绍的程序洗板；
-为避免交叉污染，加不同样品和标准品时要更换移液器吸头；
-不得让吸头接触到微孔内的液体或者微孔内表面；
-孵育时要避免光直射。建议孵育时用封板膜封板。
8.2检测步骤
1.计算需要用到的微孔数量，标记***大光吸收值孔、标准品孔和样本孔的位置。注意要考虑到都要做重复。取出需要的板条，并将未使用的板条重新用铝箔袋密封。准备同等数量的预混合板条。
2.加入100ul各标准品/样本到相应微孔，轻摇混匀后封板膜封板。
3.室温孵育45分钟。不的延长次孵育时间，不能使用自动振荡器。
4. 洗板
-孵育后，倒掉孔内液体；
-将微孔加满工作浓度洗涤液，然后倒掉洗涤液；
-用力上下在吸水纸上拍板，将微孔内液体完全拍干。
重复洗涤过程4次。
在干净的吸水纸上拍板，拍干微孔内的液体。但不可使微孔干透。
5.用多道移液器，每孔加入100ul酶偶联物溶液。来回轻摇混匀并盖封板膜。
6.孵育15分钟。
7.重复步骤4洗板。
8.显色：用多道移液器加100μl显色液到微孔，来回晃动数秒钟。
9.室温避光孵育15分钟。
10.用多道移液器加50μl终止液到各孔。来回晃动数秒钟充分混匀。
10.在1小时内，用***450nm波长读数。
9. 计算结果
-计算标准品和样品的平均吸光值；
-用计算得到的平均吸光值分别除以0标准品的吸光值并乘以100；
标准品的吸光度值（或样品）
---------------------------- X100= (%)吸光度值
0标准的吸光度值 (Bo )
-以标准品浓度值（ng/ml）的半对数值为横坐标，B/B0值为纵坐标绘制标准曲线；
-将样本的B/B0值带入校准曲线，得到相应的浓度值；
-要得到样本中******M1的浓度值，还需要将从校准曲线读到的浓度乘以相应样本的稀释倍数。
10．样品标准曲线示例
11.结果评价
计算出结果后，还需要验证检测效果。通过将得到的结果和说明书提供的技术参数比较验证。如果结果与参数不符，请检测***盒的有效期、读取吸光值使用的波长、以及操作过程是否正确。如果不是操作错误，请联系我们的技术支持。
12.***盒参数
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描述 |
参数 |
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平均Bo吸光度 |
≥0.7 OD450nm |
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B/Bo 50% |
20-50ppt |
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标准品平均变异系数 |
≤ 6 % |
13．免责声明
出现阳性结果时，必须用确证方法对样本检测。TECNA公司不承担任何因为使用者错误使用***盒造成的损失。
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供应霉菌******盒 |
******B1 |
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呕吐*** |
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玉米赤霉烯酮 |
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T2*** |
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赭曲霉*** |
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伏马*** |