ELISA检测***盒基础技术

ELISA检测***盒应用定性夹心***检测技术，用合成的HEV多肽抗原包被微孔板板条，这些多肽是中国型HEV毒株核心氨基酸序列中抗原性很强的肽段，分别来自于该毒株的开放阅读框2和开放阅读框3。将样品或标准品加入孔中并孵育，如果其中存在HEV IgM***，这些***就会与HEV 的多肽抗原结合，并固定在上面，洗板除去其它非特异性***和样品中的其它成份。然后加入羊抗人IgM-HRP（辣根过氧化物酶）酶结合物，经第二次孵育后，酶结合物就会与***次孵育结合上的HEV IgM***相结合，洗板除去未结合的酶结合物，加入TMB底物溶液，在第三次孵育时会发生酶-底物反应，只有那些含有HEV IgM***和酶结合物所形成的复合物的孔才会发生颜色变化，加入***溶液终止酶和底物间的反应，并在波长: 450nm处测量O.D.值,按照本HEV IgM***elisa***盒的测试标准, O.D.值大于或等于Cut-Off值的样品被认为是初试阳性。
elisa技术流程
ELISA的基础是抗原或***的固相化及抗原或***的酶标记。结合在固相载体表面的抗原或***仍保持其***学活性，酶标记的抗原或***既保留其***学活性，又保留酶的活性。在测定时，受检标本（测定其中的***或抗原）与固相载体表面的抗原或***起反应。用洗涤的方法使固相载体上形成的抗原***复合物与液体中的其他物质分开。再加入酶标记的抗原或***，也通过反应而结合在固相载体上。此时固相上的酶量与标本中受检物质的量呈一定的比例。加入酶反应的底物后，底物被酶催化成为有色产物，产物的量与标本中受检物质的量直接相关，故可根据呈色的深浅进行定性或定量分析。由于酶的催化效率很高，间接地放大了***反应的结果，使测定方法达到很高的敏感度。 ELISA可用于测定抗原，也可用于测定***。
然而，影响Elisa试验结果的因素很多，故加强各个环节的质量保证才能充分发挥其方法学的优点。
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