冰冻切片细胞色素C氧化酶活性染色***盒

冰冻切片细胞色素C氧化酶活性染色***盒实验开始前，制备好新鲜的线粒体置于冰槽里备用；同时将－20℃冰箱里的***融化，并预热氧电极仪到25℃。然后进行下列操作。
    加入2.5毫升 介质液（Reagent A）到反应玻璃槽
    使用微型磁力子搅拌，充分混匀
    冰冻切片细胞色素C氧化酶活性染色***盒密封反应槽
    开始记录氧浓度：起始饱和氧浓度值为0.240微摩尔分子氧/毫升（25℃）
    持续记录1分钟后，***加入20微升待测的线粒体（总量2毫克）（注意：氧浓度可能瞬时变化）
    冰冻切片细胞色素C氧化酶活性染色***盒持续记录1分钟后，***加入20微升  IV态底物液（Reagent B）――开始IV态呼吸（注意：参见注意事项9）
    冰冻切片细胞色素C氧化酶活性染色***盒持续记录2分钟：出现氧浓度缓慢下降
    继续***加入20微升  III态底物液（Reagent C）（注意：氧浓度在10秒钟内开始下滑）――开始III态呼吸（注意：参见注意事项9）
    冰冻切片细胞色素C氧化酶活性染色***盒持续记录直至出现线性下行斜线出现拐点
    分别测算III态呼吸速率和IV态呼吸速率：氧浓度降低值÷实际时间（分钟）
    计算呼吸控制率：III态呼吸速率÷IV态呼吸速率
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